細胞週期分析顯示以I7457與I7557治療後僅需24小時，即可使至少50%的細胞停滯於G2/M期，且處於亞G1群的細胞數目隨著I7457或I7557的劑量提高而增加(參見表2)。 此外，相較於對照組細胞(第3A圖)，經過20 μM的I7457(第3B圖)或I7557(第3B圖)處理的CML細胞開始變圓，而使其外觀呈氣球狀，這意味著CML細胞正經歷細胞凋亡與有絲分裂風暴。 對經藥物處理之CML細胞進行α-與β-微管蛋白之染色分析(資料未顯示)以及免疫墨點分析的結果，也進一步證實了上述的有絲分裂事件。 第4圖繪示出利用免疫墨點分析所測定之經藥物處理之CML細胞中β-微管蛋白的含量，由圖中可以看出，與對照組細胞相較之下，利用I7457與I7557治療可分別降低細胞中β-微管蛋白的含量。 治療有效量同時也是指化合物或組合物所致的毒性或有害的效果不及於其所帶來的治療利益。 在較佳的情形中，本發明之化合物或組合物於投藥時，應採用適當的劑量並持續一段時間，以使得症狀的數目和/或嚴重性得以降低。
一種戈氏副擬桿菌用於製備一治療肺癌之醫藥組成物的用途，其中該戈氏副擬桿菌的寄存編號為BCRC 。 在口服餵食戈氏副擬桿菌MTS01之後的21天，將各組小鼠犧牲，接而將肺移除並觀察肺的外觀。 本文所述之「有效濃度」係表示能直接治療帶有肺癌之個體所需戈氏副擬桿菌的數量。 有效濃度依所治療的生物種類或個體差異而可能不同，但可藉由例如濃度遞增試驗以實驗決定其有效濃度。 藉由測量有絲分裂不活化複合蛋白以及其上游調控蛋白的表現量，進一步探討I7457或I7557-誘發之有絲分裂不活化過程；上述有絲分裂不活化複合蛋白如Cdc2激酶與細胞週期素B1；而上游調控蛋白如Plk-1、Chk-1與Chk-2。
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「化合物」、「組合物」、「活性化合物」、「藥劑」或「醫藥品」等詞在此可互相替換，且都是指當施用於一對象(人類或動物)時，能夠透過局部和/或全身性作用而誘發所欲藥學和/或生理反應的一種化合物或組合物。 一般來說，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量約0.1%至99%(重量%)。 在某些實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少1%(重量%)。 在特定實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少5%(重量%)。
在另一實施例中，可透過本發明兩種化合物之任一種進行治療的癌症是對化學藥物治療不敏感的NSCLC。 在另一實例中，所述癌症為目前仍以手術切除為最主要治療手段的食道癌。 為此，先依據本文「材料與方法」段落中所揭示的步驟，對上述胰臟癌細胞施以放射線處理，然後再繼續培育殘存的癌細胞，並以細胞群落分析來觀察這些細胞後續形成細胞群落的能力。
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圖1是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的存活率上的效用之數據圖。 化學藥物治療 由圖1可見，靜脈注射LLC細胞21天後，病理對照組小鼠的存活率為20%，實驗組小鼠的存活率為50%，並高於比較組小鼠的存活率，而正常對照組小鼠在整個實驗期間是健康且存活的。 化學藥物治療 本實施例的結果顯示，本發明戈氏副擬桿菌菌株MTS01可增加帶有肺癌之小鼠的存活率。 利用本發明實施例之戈氏副擬桿菌於治療肺癌時，可為但不限於以口服方式給藥。
- 該小鼠係飼養在無特定病原體的設施中，並按照美國國立衛生研究院的指導原則進行治療。
- 所述方法包含對該個體施用一治療有效量的I7457或是I7557或是其藥學上可接受的鹽類。
- 圖中所示的結果顯示I7457與I7557皆可有效減少細胞數目，且此一效果與劑量相關；當使用20 μM的試驗化合物時，可使抗藥性CML細胞的數目至少減少為對照組細胞的65%。
- 之後，在室溫下以A型RNA酶處理細胞約30分鐘，離心後將細胞沉澱物重新懸浮在適量的碘化丙啶(20 μg/ml)中，然後以流式細胞儀測定出不同週期的細胞並計數其數目。
- 在某些實施方式中，所述方法更包含在對該個體施用I7457或是I7557的同時、之前或之後，也對該個體施用另一種已知可改善癌症治療效果的藥劑。
- 有最低的尿失禁併發症，對勃起功能障礙的影響也最少，但有可能造成膀胱頸結疤阻塞的副作用。
在另一些實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少10%(重量%)。 在又另一些實施方式中，本發明化合物的含量佔整體藥學組合物重量的至少25%(重量%)。 如所述，抗藥性是指癌細胞的一種狀態，尤指對單一治療性藥劑發展出抗性。
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本揭示內容至少有一部分是肇因於一種從山葵中分離出來的異硫氰酸酯類化合物，特別是6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯及其衍生物，6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯，具有抑制癌細胞(特別是，具有抗藥性之癌細胞)生長活性，這樣的發現而發展出來的。 化學藥物治療 因此，可將這兩種異硫氰酸酯類化合物，作為能治療癌症之醫療藥劑的先導化合物。 使用異硫氰酸酯類來治療癌症之方法及用途 本揭示內容是有關於某些小分子的新穎用途，特別是異硫氰酸酯類化合物的新穎用途，其可用來製造能治療癌症的醫藥品或藥學組合物。 綜上所述，本發明戈氏副擬桿菌可藉由增加帶有肺癌之個體的存活率、平均存活時間、及體重，並抑制肺腫瘤生長，達到治療肺癌之功效。
若以腸胃外方式施用，可將本發明化合物配方成為液態的藥學組合物，其可為能以靜脈內注射、肌肉內注射、皮下注射或腹膜內注射等方式施用的無菌溶液或懸浮液。 可用來製造上述無菌注射溶液或懸浮液的稀釋劑包括，但不限於，1,3-丁二醇、甘露醇、水、林格氏溶液、等張性氯化鈉溶液。 也可使用脂肪酸(如，油酸)及其之甘油酯衍生物，或是天然藥學可接受的油(如，橄欖油或菜籽油)來製造可供注射用的溶液或懸浮液。
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體重增加的計算公式為最終體重(4週)減去起點體重(0週)。 本實施例中所用之戈氏副擬桿菌(Parabacteroides goldsteinii,P.goldsteinii)MTS01是一種能治療肺癌的益生菌株。 該戈氏副擬桿菌是寄存於德國微生物菌種保存中心；民國107年10月29日；編號DSM 化學藥物治療 32939；以及寄存於食品工業發展研究所；民國108年2月15日；編號BCRC 。 戈氏副擬桿菌為絕對厭氧細菌，需於37℃之無氧培養箱培養約48小時；其中，該系統包含10%的二氧化碳、10%的氫氣、及80%的氮氣。
有鑒於此，此領域亟需一種或一類可用來治療上述具有抗藥性或是對目前化學藥物治療不敏感之癌症的有效藥學化合物。 本實施例比較組所用之迪氏副擬桿菌購自於美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)。 使用YCFA培養基進行培養，在厭氧室中於37℃在50mL的YCFA培養基中培養24小時。
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由圖4可見，在帶有LLC的組別中的多個部位發現了實體瘤(如箭頭所示)。 而與病理對照組相較之下，實驗組小鼠的肺腫瘤數目有顯著的減少，而比較組則無此現象。 圖2是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的平均存活時間上的效用之數據圖。 在本發明的一實施例中，該醫藥組成物增加一帶有肺癌之個體的存活率、平均存活時間及體重，且抑制肺腫瘤生長。
所述方法包括對該個體施用一治療有效量的上述兩種化合物之一或是其藥學上可接受的鹽類。 本發明所述兩種化合物可有效地使至少45%的癌細胞生長停滯在G1/M週期，防止這些癌細胞劑續增生。 適合以本發明化合物進行治療的癌症是選自胰臟癌、慢性骨髓白血病、及非小細胞肺癌(non-small-cell lung carcinoma,NSCLC)。 較佳是使用本發明所揭示的任一種化合物來治療具有抗藥性的癌細胞。 圖3是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的體重上的效用之數據圖。 由圖3可見，與正常對照組相較之下，病理對照組小鼠的體重增加有顯著的降低。
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戈氏副擬桿菌菌株MTS01在活體內不同時間點抗肺癌上的效用評估 本實施例中使用的實驗動物、戈氏副擬桿菌、迪氏副擬桿菌及路易氏肺癌之種類及培育方式是相同於實施例1所記載者。 接著，將正常對照組、病理對照組及實驗組小鼠的肺葉固定於10%中性緩衝福馬林(neutral-buffered formalin)中處理，然後以石蠟包埋並切成4μm的厚度。 之後，使用玻片掃描儀對蘇木精與曙紅(Hematoxylin and Eosin,H&E)染色的肺部進行組織學檢查，並對整個肺葉拍照。 使用H&E染 色的肺部切片進行全玻片掃描及500μm或250μm光學變焦的代表性影像。 為了研究戈氏副擬桿菌對改善LLC引起的體重減輕的影響，在實驗期間的4週內每週監測各組小鼠的體重。
舉例來說，癌細胞可能會對諸如敏畢瘤、敏克瘤和溫諾平之類的長春花生物鹼類；諸如阿黴素、丹阿黴素及艾達黴素之類的蒽環黴素；微管蛋白安定藥物(紫杉醇)或酪胺酸激酶活性抑制劑(如，達沙替尼、尼祿替尼和伊馬替尼)發展出抗藥性。 目前用來治療癌症的標準方法如下：手術切除、化學藥物治療、放射線治療、免疫治療及生物性治療等；在這些方式中，以手術切除及化學藥物治療最常被採用。 4.荷爾蒙療法：單獨使用僅能壓制癌細胞，無法根治，治療方式包含定期施打荷爾蒙針，一次性切除雙側睪丸，有時會伴隨合併經尿道攝護腺切除術。 利用放射線照射攝護腺，破壞分裂繁殖的癌細胞，屬於根治性治療，可合併荷爾蒙療法。
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「化學藥物治療」顧名思義就是以可摧毀癌細胞的藥物來進行治療。 現階段，「化學藥物治療」通常是指使用可快速影響細胞分裂的毒性藥物進行治療。 化學藥物治療 但是，在某些情況下，癌細胞卻會對一或多種這類細胞毒性藥物發展出抗藥性或是變得不敏感，因此，有許多相關研究希望找到能夠成功治療癌症，特別是具有抗藥性或是對抗癌藥物不敏感，的其他有效治療藥物或是手段。
該菌之液態培養液為NIH巰基乙酸肉湯(購自BD，美國，編號為225710)，固態培養基則為厭氧血液瓊脂盤(Ana.BAP)(購自啟新生物科技公司，台灣)。 該菌長期保存於-80℃冰箱，保護液為25%之甘油，無須特殊降溫處理，且可經由冷凍乾燥進行保存，以穩定其活性。 當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對齊進行各種修飾。 上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。 雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本揭示內容，任何熟習此技藝者，在不脫離本揭示內容之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本揭示內容之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。 第1與2圖分別繪示出I7457與I7557對於抗伊馬替尼CML細胞之細胞存活率的影響。
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本發明化合物(即，I7457或是I7557)可經由口服(如，口服用膠囊、懸浮液或藥錠)、或腸胃外等適當方法施用。 腸胃外施用方式包括例如肌肉內注射、靜脈注射、皮下注射或腹膜內注射等系統性方式施用。 或是，也可透過穿皮膜方式施用，如局部皮膚塗抹或是吸入性(如支氣管內、鼻腔內、口腔內或鼻滴劑等)；或是直腸內方式施用。 在較佳實施方式中，可經由口服方式(如，透過食物)將本發明化合物投予個體。
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所述實施方式與專有名詞是為了闡述發明內容之用，並非用以限制本揭示內容範疇。 本揭示內容範疇也涵蓋並未特意揭示於此，但習知技藝人士在閱讀過本揭示內容後可輕易推知的其他實施方式。 美國與台灣食藥署核准這樣特徵的病人透過荷爾蒙合併其他藥物治療，進而延長有效治療的時間和整體存活，並且提升生活品質。 5.化學藥物治療：在荷爾蒙療法失去抗性後，開始實施化學藥物治療，攝護腺癌的化療相對其他疾病而言更加單純，僅有一兩種藥物注射為主。 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該醫藥組成物的劑型係係一噴霧氣體、一溶液、一半固態、一固態、一明膠膠囊、一軟膠囊、一錠劑、一口含片、一口香糖及/或一冷凍乾燥粉末製劑。
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可以習知的方法從植物、種子或植物萃出物中分離出本發明之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯(或I7457)。 含有高量異硫氰酸酯類化合物的植物包括，但不限於，青花菜、芽菜、包心白菜、花椰菜、芥菜子、山葵、白蘿蔔、木瓜籽等。 本發明之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯化合物較佳是自山葵中分離而得。 至於其之衍生物，6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯(或I7557)，則可向商業實驗室(如，LKT Laboratories,Inc(St. Paul,Minnesota,USA))購買。
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圖中所示的結果顯示I7457與I7557皆可有效減少細胞數目，且此一效果與劑量相關；當使用20 μM的試驗化合物時，可使抗藥性CML細胞的數目至少減少為對照組細胞的65%。 實施例1 I7457與I7557可抑制抗藥性CML K562R細胞之生長 利用上文「材料與方法」部分所述的步驟進行誘導而得到對伊馬替尼具抗性的人類CML細胞株K562R。 分別利用細胞存活與細胞週期分析以及免疫墨點分析與劉氏染色法來評估I7457與I7557的抑制生長活性。 在本文中，「治療(treating或treatment)」一詞意指對癌細胞或一個體施用所述化合物，以使至少45%、50%、55%、60%或65%的癌細胞生長停滯在G2/M週期而延緩癌細胞生長，藉使腫瘤體積縮小。 因此，「治療」一詞在此亦表示殺死癌細胞或誘發癌細胞的細胞凋亡。
其給藥時可與一般食物一同食用，因此製備包含戈氏副擬桿菌醫藥組成物時，該醫藥組成物可進一步包括蛋白質、單醣、雙醣、寡醣、低聚醣、多醣、碳水化合物、胺基酸、脂質、維他命或其任意組合的成分。 在某些實施方式中，本發明醫藥品及藥學組合物中更包含另一種已知可改善癌症治療效果的藥物。 圖6是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在抑制肺腫瘤生長上的效用之數據圖。 由圖6可見，與正常對照組相較之下，病理對照組的肺腫瘤重量有顯著的增加。