表3結果顯示本發明化合物能夠抑制FLT3-ITD表達陽性MV4：11和MOLM-13細胞系的生長(誘導細胞凋亡)，其IC50濃度值可達次奈莫耳。 本發明化合物與對照化合物(見表2)用DMSO溶解，化合物純度達98%以上。 細胞培養基分別選用RPMI1640、IMDM，加入5-20%胎牛血清，100U/mL青黴素和100μg/mL鏈黴素，2mM穀胺醯胺或者1mM丙酮酸鈉。 所用細胞系名稱、種類、主要基因特徵、培養基和細胞來源見下表1，其中“amp”為基因擴增；“+++”為基因過/高表達。 細胞主要基因特徵分別來源於COSMIC Cell Lines Project和相關研究論文。 本發明的已知起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或購買自上海達瑞精細化學品有限公司、上海泰坦科技股份有限公司、上海潤捷化學試劑有限公司、TCI、Aldrich Chemical Company。
泛素化是指泛素分子在一系列特殊的酶作用下，將細胞內的蛋白質分類，從中選出靶蛋白分子，對靶蛋白進行特異性修飾的過程，形成靶蛋白多聚泛素鏈。 泛素化是一個三酶級聯反應，即，需要有由三個酶催化的一系列反應的發生，整個過程也被稱為泛素化信號通路。 蛋白質泛素化是生物體內一種常見的翻譯後修飾，參與細胞週期、增殖、凋亡、分化、轉移等幾乎一切生命活動的調控。 E3泛素連接酶(在人類中已知有600多種)賦予泛素化底物特異性，由於其對某些蛋白質底物的特異性，其較一般的蛋白酶更具吸引力。 E3泛素連接酶的配體的開發已被證明具有挑戰性，部分原因是它們必須破壞蛋白質與蛋白質的相互作用。
- 與實施例54的製備方法相同，除了用5-溴戊酸乙酯代替步驟1中的7-溴庚酸乙酯，並用3-胺基-5-第三丁基異噁唑代替步驟3中的5-第三丁基-2H-吡唑-3-基胺，得到5-((1-(4-(3-(5-(第三丁基)異噁唑-3-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)-N-(2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-側氧異吲哚-4-基)戊醯胺。
- 蛋白質泛素化是生物體內一種常見的翻譯後修飾，參與細胞週期、增殖、凋亡、分化、轉移等幾乎一切生命活動的調控。
- 術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴基團，其包括3至20個環原子，其中一個或多個環原子選自氮、氧或Sm(其中m是0至2的整數)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。
- 將步驟6得到的5-[4-(3-第三丁基-5-3-[4-(5-甲氧基-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲基]-吡唑-1-基)-哌啶-1-基]-戊酸乙酯(130mg，0.211mmol)溶解於乙醇中，室溫加入4M氫氧化鈉水溶液，加畢室溫反應1小時。
- 烯基的非限定性實例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基等。
TLC檢測反應完成，將反應液倒入100ml飽和碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷100ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到8.49g淡紅色油狀粗品產物。 術語“烷基”指包括1至20個碳原子的飽和直鏈或支鏈脂族烴基團，較佳包含1至18個碳原子，更佳包含1至10個碳原子，更佳包含1至6個碳原子，甚至更佳包含1至4個碳原子。 烷基的非限定性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、 新戊基、己基、異己基、正庚基、異庚基、正辛基、異辛基、正壬基、正癸基等。 烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。 化療方法 化療方法 將化合物80(480mg，0.503mmol)溶解於4ml二氯甲烷中，將反應體系降溫到0-5℃，加入4ml三氟乙酸，加畢升溫至室溫反應2小時。 TLC檢測反應完成，將反應液減壓濃縮，殘餘物加入10ml乙酸乙酯打漿1小時，過濾，固體鼓風乾燥(60℃)4小時，得358mg固體狀產物。
實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。 NMR的測定是用(Bruker AVANCE-400)核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)、氘代氯仿、氘代甲醇，內標為四甲基矽烷。 本發明另一方面將通式所示的化合物或其藥學上可接受的鹽製備成臨床上可使用的藥用組成物。 根據臨床適應症，給藥途徑與方式，其藥用製劑包括但不限於口服製劑如片劑、凝膠劑、軟/硬膠囊、乳劑、分散性粉劑、顆粒劑、水/油懸乳劑；注射劑包括靜脈注射劑、肌肉注射劑、腹腔注射劑、直腸給藥栓劑、顱內注射劑，這些劑型可為水溶液也可為油類溶液；局部製劑包括霜劑、軟膏劑、凝膠劑、水/油溶液以及包合物製劑；吸入劑型包括細粉、液體氣溶膠以及適合於體內植入的各種劑型。 二價雜環基是指如上定義的雜環基，其具有2個從母環上的相同原子或兩個不同的原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。
有機相用飽和食鹽水100ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得800mg白色固體產物。 將步驟4得到的4-(3-第三丁基-5–吡唑-1-基)-哌啶-1-甲酸第三-丁酯(3.0g，5.1mmol)溶解於乙酸乙酯中。 室溫加入2M的EA/HCl，加畢繼續室溫反應5個小時，TLC檢測反應完成，過濾，乙酸乙酯洗滌，鼓風乾燥(60℃)4小時，得2.63g淡紫色固體狀產物。 將步驟1得到的4-肼基-哌啶-1-甲酸第三丁酯(11.2g，0.052mol)和氰基頻那酮(購自TCI)(11.68g，0.063mol)溶解於乙醇中。 TLC檢測反應完全後，將反應液冷卻至0-5℃，有固體析出，抽濾，濾液減壓濃縮。 殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：二氯甲烷/甲醇)純化，得3g固體狀的4-(5-胺基-3-第三丁基-吡唑-1-基)-哌啶-1-羧酸第三丁酯。
直到2017年以後才有幾個靶向小分子藥物獲批應用於臨床實踐，但其長期臨床效果有待進一步的臨床驗證。 如請求項20所述的用途，其中如請求項1至16中任一項所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者如請求項18所述的醫藥組成物可以與另外一種或多種藥物如癌症治療藥物或者治療方法如癌症治療方法同時、分別或相繼組合使用。 如表8結果顯示，本發明化合物能夠有效的誘導MV4：11和MOLM-13細胞中表達的FLT3-ITD蛋白的降解。 細胞培養：人白血病MOLM-13細胞株懸浮培養，培養條件為RPMI 1640培養基中加10%胎牛血清、100U/mL青黴素和100μg/mL鏈黴素，37ºC 5%CO2孵箱培養。 當細胞飽和度為80%~90%，數量到達要求時，收取細胞，計數，接種。 細胞培養：人白血病MV4：11(ATCC-CRL95918)細胞株懸浮培養，培養條件為RPMI 1640培養基中加10%胎牛血清，100U/mL青黴素和100μg/mL鏈黴素，37ºC 5%CO2孵箱培養。
與實施例1的製備方法相同，除了用5-胺基-1-戊醇代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5–苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用4-氟酞酐代替步驟1中的3-氟酞酐，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3–乙氧基)-苯并咪唑-1-基]-苯基-脲。 與實施例5的製備方法相同，除了用3-胺基-5-第三丁基異噁唑代替步驟10中的5-第三丁基-2H-吡唑-3-基胺，得到1-(5-第三丁基-異噁唑-3-基)-3-[4-(5-乙氧基)乙氧基]乙氧基苯并咪唑-1-基)苯基]脲。 與實施例4的製備方法相同，除了用3-胺基-5-第三丁基異噁唑代替步驟10中的5-第三丁基-2H-吡唑-3-基胺，得到1-(5-第三丁基-異噁唑-3-基)-3-(4-乙氧基)乙氧基]苯并咪唑-1-基-苯基)-脲。
不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，所屬技術領域具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。 例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。 化療方法 除非另有規定，本文使用的所有技術和科學術語具有與所屬技術領域具有通常知識者的通常理解相同含義。
與實施例62的製備方法相同，除了用6-庚炔醇代替步驟1中的4-戊炔-1-醇，得到2-(4-(7-((1-(4-(3-(3-(第三丁基)-1H-吡唑-5-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)己-1-炔-1-基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-側氧異吲哚-5-基)甲基)-2,2-二氟乙醯胺。 與實施例49的製備方法相同，除了用1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3–脲代替步驟2中的1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5-庚-6-炔氧基-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲，得到2,2-二甲基丙酸3-(4–1-側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基甲基酯。 於室溫將4-哌啶基哌啶(1g，5.942mmol)、DIEA(2.3g，17.827mmol)溶解於30mlTHF，降溫至0℃至5℃，緩慢滴入氯甲酸氯甲酯(0.92g，7.131mmol)，滴加完畢後，移走冰鹽浴，慢慢升溫至室溫攪拌1小時。 將反應液倒入100ml水中，用二氯甲烷150ml萃取，有機相用飽和食鹽水150ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.75g油狀物。
於室溫將-乙酸第三丁酯(1.33g，3.48mmol)溶解於15ml DMF中，然後加入吡啶(0.82g，10.44mmol)，冰鹽浴降溫至-5℃至0℃。 將氯甲酸苯酯(818mg，5.2mmol)慢慢滴加到上述溶液中，過程中控制溫度在-5℃至0℃。 將反應液倒入50ml水中，用乙酸乙酯50ml萃取，有機相用飽和食鹽水40ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.86g粗品產物。
與實施例2的製備方法相同，除了用化合物代替實施例2中的化合物，得到1-[4-(5–苯并咪唑-1-基)-苯基]-3-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-脲。 較佳地，A選自吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡咯基；其任選進一步被選自氫、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷氧基、羥基、胺基、醯基、酯基、C3-C6環烷基、5-6員雜環基、C6-C10芳基和5-6員雜芳基的基團所取代；較佳被C1-C6烷基所取代。 R1為氫，且A選自5至7員雜芳基，該5至7員雜芳基任選進一步被選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷氧基、羥基、胺基、醯基、酯基、C3-C6環烷基、5-6員雜環基、C6-C10芳基和5-6員雜芳基的一個或多個基團所取代。 於70℃，將1-(4-胺基苯基)-1H-苯并咪唑-5-醇(1.42g，6.31mmol)、7-溴庚酸乙酯(1.8g，7.59mmol)和碳酸銫(6.0g，18.40mml)在20ml DMF中攪拌1小時。
於室溫4–哌嗪-1-甲酸第三丁酯的製備(1.2g，2.74mmol)溶解於15mlDMF中，然後加入吡啶(325mg，4.11mmol)，冰鹽浴降溫至-5℃-0℃。 將氯甲酸苯酯(524mg，3.34mmol)慢慢滴加到上述溶液中，過程中控制溫度在-5℃-0℃。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入50ml水中，用 乙酸乙酯50ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水50ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.5g粗品產物。
慢慢滴加83a(4.6g，17.6mmol，實施例75中製備)的12mlDMF溶液，加畢緩慢升溫室溫反應過夜。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入150ml水中，乙酸乙酯萃取80ml×2萃取，合併有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到5.3g黃色固體狀產物。 將3-[4-(第三丁基-二甲基-甲矽烷氧基)-1-側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮(1g，2.67mmol)溶解於15ml四氫呋喃中，降溫0℃至5℃，滴加四丁基氟化銨四氫呋喃溶液(1M，5ml)，滴畢，緩慢升溫室溫反應2小時。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入80ml飽和食鹽水中，乙酸乙酯50ml×2 萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得583mg固體狀產物。 將4-[2-(1-4-[3-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-脲基]-苯基]-1H-苯并咪唑-5-基氧基)-乙基]-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(500mg，9.2mmol)溶解於6ml二氯甲烷中，於室溫加入3ml三氟乙酸，攪拌1.5小時。
非限定性實例包括氯甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟乙基、 2,2-二氟乙基、2-氟丙基、2-氟丙-2-基、2,2,2-三氟乙基、1,1-二氟乙基、1,3-二氟-2-甲基丙基、2,2-二氟環丙基、(三氟甲基)環丙基、4,4-二氟環己基和2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基。 術語“伸烷基”指包括1至20個碳原子的飽和直鏈或支鏈脂肪族烴基團，其具有2個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基，較佳含有1至12個碳原子，更佳含有1至6個碳原子。 伸烷基的非限制性實例包括但不限於亞甲基(-CH2-)、1,1-伸乙基(-CH-)、1,2-伸乙基(-CH2CH2)-、1,1-伸丙基(-CH-)、1,2-伸丙基(-CH2CH-)、1,3-伸丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-伸丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1,5-伸丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。 J1和J2各自獨立地選自鹵素、羥基、胺基、炔基和羧基；Y、U、Y1、Y2、Y3、Y4、A、E、L、R1、R2如通式中所定義。 “任選”或“任選地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。
TLC檢測反應完全後，將反應液濃縮，加入100ml水，乙酸乙酯萃取(100ml×3)，有機相用飽和NaCl溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到11.2g油狀的4-肼基-哌啶-1-甲酸第三丁酯。 與實施例62的製備方法相同，除了用溴丙炔代替步驟1中的4-戊炔-1-醇，得到2-(4-(3-((1-(4-(3-(3-(第三丁基)-1H-吡唑-5-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)丙-1-炔-1-基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-側氧異吲哚-5-基)甲基)-2,2-二氟乙醯胺。 與實施例62的製備方法相同，除了用10-十一炔醇代替步驟1中的4-戊炔-1-醇，得到2-(4-(11-((1-(4-(3-(3-(第三丁基)-1H-吡唑-5-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)十一-1-炔-1-基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-側氧異吲哚-4-基)甲基)-2,2-二氟乙醯胺。
例如，“任選被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。 本發明進一步涉及根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物在製備雙功能FLT3酪胺酸激酶降解劑和抑制劑中的用途。 本發明屬於醫藥領域，涉及一種新型雙功能蛋白降解靶向嵌合體類化合物、其製備方法及含有其的醫藥組成物，以及其用於降解和抑制FLT3酪胺酸蛋白激酶的用途，包括用於治療FLT3介導的信號通路異常引起的相關疾病的用途，特別是在癌症治療中的用途。 一種如請求項1至16中任一項所述的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學 上可接受的鹽或者如請求項18所述的醫藥組成物在製備雙功能FLT3酪胺酸激酶降解劑和抑制劑中的用途。 懸浮細胞直接離心收集(1700rpm，3分鐘)，棄上清，計數細胞。
將反應液降溫至室，倒入200ml水中，有固體析出，過濾，濾餅用200ml水洗滌。 鼓風乾燥(60℃)8小時，得固體2.5g，產品無需純化，直接用於下一步反應。 與實施例39的製備方法相同，除了用氯甲基碳酸異丙酯代替實施例39步驟1中苯甲酸氯甲酯，得到碳酸3-(4–1,3-二側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基甲基酯異丙基酯。 與實施例39的製備方法相同，除了用辛酸氯甲酯代替實施例39步驟1中苯甲酸氯甲酯，得到辛酸3-(4–1,3-二側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-2,6-二側氧-哌啶-1-基甲基酯。
- 雜芳基可以是任選取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。
- 本發明另一方面將通式所示的化合物或其藥學上可接受的鹽製備成臨床上可使用的藥用組成物。
- 雜環基可以是任選取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。
- 與實施例39的製備方法相同，除了用辛酸氯甲酯代替實施例39步驟1中苯甲酸氯甲酯，得到辛酸3-(4–1,3-二側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-2,6-二側氧-哌啶-1-基甲基酯。
- 將反應液冷卻至室溫後，緩慢倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙酸乙酯萃取(100ml×2)，有機相用飽和NaCl溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得1.8g黃色固體狀的粗品。
- 與實施例62的製備方法相同，除了用6-庚炔醇代替步驟1中的4-戊炔-1-醇，得到2-(4-(7-((1-(4-(3-(3-(第三丁基)-1H-吡唑-5-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)己-1-炔-1-基)苯基)-N-((2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-側氧異吲哚-5-基)甲基)-2,2-二氟乙醯胺。
3-(第三丁基-二甲基-矽烷氧基)-2-甲基-苯甲酸甲酯(8g，28.6mmolmol)、NBS(5.6g，31.43mmol)和AIBN(469mg，2.86mmol)於100ml四氯化碳中回流反應16小時，TLC檢測反應，少量原料剩餘。 於50℃，將7-(1–1H-苯并咪唑-5-基氧基)-庚酸乙酯(1.5g，2.74mmol)、氫氧化鋰一水合物(230mg，5.47mmol)在20ml四氫呋喃和5ml的水中攪拌14小時。 將反應液冷卻至室溫，加入200ml水，用HCl調PH為5-6，過濾，濾餅用200ml水洗滌。 與實施例30的製備方法相同，除了用化合物代替步驟1中的化合物，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5–苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲。 3-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(25g，0.109mol)、NBS(21.4g，0.12mol)和AIBN(900mg，5.5mmol)於200ml四氯化碳中80℃反應4小時。 化療方法 TLC檢測反應完成，降溫至室溫，加入100ml石油醚和20ml甲基第三丁基醚室溫攪拌1小時。
與實施例1的製備方法相同，除了用3-胺基-5-第三丁基異噁唑代替步驟10中的5-第三丁基-2H-吡唑-3-基胺，得到1-(5-第三丁基-異噁唑-3-基)-3-乙氧基)苯并咪唑-1-基]-苯基-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用乙醇胺代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，並用3-胺基-5-第三丁基異噁唑代替步驟10中的5-第三丁基 -2H-吡唑-3-基胺，得到1-(5-第三丁基-噁唑-2-基)-3-[4-(5-苯并咪唑-1-基)苯基]-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用1-胺基-3,6,9-三氧雜-11-十一醇代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5-乙氧基)乙氧基]-乙氧基-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用2-[2-(2-胺基-乙氧基)乙氧基]乙醇代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-(4-乙氧基)乙氧基]-苯并咪唑-1-基-苯基)-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用乙醇胺代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲。
將步驟6得到的5-[4-(3-第三丁基-5-3-[4-(5-甲氧基-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲基]-吡唑-1-基)-哌啶-1-基]-戊酸乙酯(130mg，0.211mmol)溶解於乙醇中，室溫加入4M氫氧化鈉水溶液，加畢室溫反應1小時。 TLC檢測反應完全後，將反應液倒入100ml水中，檸檬酸水溶液調節pH為5-6，用乙酸乙酯50ml×2萃取。 有機相用飽和食鹽水100ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到100mg黃色固體狀產物。 將3-羥基-2-甲基-苯甲酸甲酯(5g，30mmol)溶解於50mlDMF中，於室溫加入咪唑(5.1g，75mmol)，將反應體系降溫至0℃至5℃，緩慢滴入第三丁基二甲基氯矽烷(5g，33mmol)，滴畢，於室溫攪拌16小時。 將反應液倒 入500ml飽和食鹽水中，水相用乙酸乙酯80ml×2萃取，合併有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到8g粗品產物。 將2-(2,6-二側氧-哌啶-3-基)-4-氟-異吲哚-1,3-二酮(4.8g，17.6mmol)溶解於40ml DMF中，室溫加入碳酸銫(8.6g，26.4mmol)和催化量碘化鉀，加畢，將反應體系降溫至0-5℃。
與實施例74步驟2-步驟3的製備方法相同，除了用磷酸二-第三丁基酯氯甲基酯代替實施例74步驟2中的74a，得到磷酸二-第三丁基酯((3-(4-(5-((1-(4-(3-(5-(第三丁基)異噁唑-3-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)戊醯胺基)-1-側氧異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基)甲基)酯。 與實施例74步驟2-步驟3的製備方法相同，除了用-2-第三丁氧羰基胺基-3-甲基丁酸氯甲基酯代替實施例74步驟2中的74a，得到(第三丁氧羰基)-L-纈胺酸(3-(4-(5-((1-(4-(3-(5-(第三丁基)異噁唑-3-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)戊醯胺基)-1-側氧異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基)甲基酯。 與實施例74步驟2-步驟3的製備方法相同，除了用丁酸氯甲酯代替實施例74步驟2中的74a，得到丁酸(3-(4-(5-((1-(4-(3-(5-(第三丁基)異噁唑-3-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)戊醯胺基)-1-側氧異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基)甲基酯。 與實施例74的製備方法相同，除了用嗎啉代替實施例74步驟1中的4-哌啶基哌啶，得到嗎啉-4-羧酸(3-(4-(5-((1-(4-(3-(5-(第三丁基)異噁唑-3-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)戊醯胺基)-1-側氧異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基)甲基酯。
傳統小分子抑制劑藥物一方面需要靶向於具有易於控制活性位點的蛋白質；另一方面還需要高劑量才可達到足夠的IC90濃度，得到顯著治療效果；同時癌細胞可以藉由基因突變引起靶蛋白結構變異或構型改變而降低或失去與藥物的結合力，產生獲得性耐藥。 為了避免這些問題，已經嘗試替代治療策略來特異性地敲低靶蛋白，諸如RNAi和CRISPR/Cas9的遺傳技術可以顯著降低蛋白質水平，但與這些方法相關的藥物代謝動力學特性包括代謝穩定性和組織分佈迄今為止限制了它們作為臨床藥物的發展。 化療方法 化療方法 患者體內功能失常的癌變白細胞不受控制地增生和積累，導致正常血細胞的生成受到影響。 過去40年，AML的臨床治療主要採用“7+3”化療方法，無新的其它有效療法。
伸炔基的非限制性實例包括但不限於1,2-伸乙炔基(-CH≡CH-)、1,1-伸丙炔基(-CH(C≡CH)-)、1,3-伸丙烯基(-C≡C-CH2-)、1,4-伸丁基(-C≡CCH2CH2-)和1,5-伸丁基(-C≡CCH2CH2CH2-)等。 在一個較佳的實施方案中，在上述方法中，根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物可以與另外一種或多種藥物如癌症治療藥物或者治療方法如癌症治療方法同時、分別或相繼組合使用。 本發明還涉及一種降解和抑制FLT3酪胺酸激酶的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物。 本發明進一步涉及一種根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物，其用作雙功能FLT3酪胺酸激酶降解劑和抑制劑的用途。
將反應液倒入100ml水中，用乙酸乙酯150ml萃取，有機相用飽和食鹽水150ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.3g粗品產物。 將[2-(2-羥基-乙氧基)-乙基]胺基甲酸第三丁酯(170g，0.829mol)溶解於1L二氯甲烷中，加入三乙胺(125.5g，1.243mol)，降溫至小於-5℃，緩慢滴入用200ml二氯甲烷稀釋的甲磺醯氯(113.4g，0.995mol)，保持溫度小於-5℃，10分鐘後滴畢，保持溫度攪拌20分鐘。 將反應液倒入200ml飽和食鹽水中，滴入乙酸(1.4當量)，用二氯甲烷200ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到190g淡黃色油狀粗品產物。
於140℃，將3-氟酞酐(28g，168mmol)、3-胺基-2,6-哌啶二酮鹽酸鹽(27.74g，168mmol)和乙酸鈉(16.5g，201.6mml)在420ml乙酸中攪拌14小時。 鼓風乾燥(60℃)8小時，得白色固體38g，產品無需純化，直接用於下一步反應。 雜芳基可以是任選取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。 芳基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。
TLC檢測反應完全後，將反應液減壓濃縮，殘餘物加入100ml水溶解，胺水調節pH為8-9，用二氯甲烷50ml×2萃取。 有機相用飽和食鹽水100ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到60mg黃色固體狀產物。 於室溫，將4-(5-戊-4-炔氧基-苯并咪唑-1-基)-苯胺(16g，54.8mmol)溶解於150ml DMF中，然後加入吡啶(13g，164mmol)，冰鹽浴降溫至-5℃-0℃。 將氯甲酸苯酯(12.9g，82.2mmol)(用10ml四氫呋喃稀釋)慢慢滴加到上述溶液中，過程中控制溫度在-5℃-0℃。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入200ml水中，用乙酸乙酯150ml萃取，有機相用飽和食鹽水150ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到25.6g粗品產物。 將[1-(4-胺基-苯基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-乙酸第三丁酯(910mg，2.67mmol)溶解於90mlDMF中，然後加入吡啶(633mg，8.01mmol)，冰鹽浴降溫至-5℃-0℃。